BỘ XỘT NGHIỆM ĐỊNH LƯỢNG 25-HYDROXY VITAMIN D (25-OH VD)
Mô tả
Bộ xét nghiệm định lượng 25-Hydroxy Vitamin D (25-OH VD) – Phương pháp miễn dịch hoá phát quang
(25-Hydroxy Vitamin D (25-OH VD) Assay Kit – Chemiluminescent Immunoassay)
【Quy cách đóng gói】
- 50 test/hộp – Chất hiệu chuẩn: 0,5 mL × 2
- 2 × 50 test/hộp – Chất hiệu chuẩn: 0,5 mL × 2
- 4 × 50 test/hộp – Chất hiệu chuẩn: 1,0 mL × 2
- 50 test/hộp – Chất hiệu chuẩn: 0,5 mL × 6
- 2 × 50 test/hộp – Chất hiệu chuẩn: 0,5 mL × 6
- 4 × 50 test/hộp – Chất hiệu chuẩn: 1,0 mL × 6
【Mục đích sử dụng】
Bộ xét nghiệm này được sử dụng để định lượng in vitro nồng độ 25-hydroxyvitamin D (25-OH VD) trong mẫu huyết thanh người.
Vitamin D cần thiết cho sự phát triển xương bình thường và quá trình chuyển hoá canxi và phospho. Chất chuyển hoá chính của vitamin D là 25-hydroxyvitamin D. Trong cơ thể người tồn tại hai dạng vitamin D:
- Vitamin D₃: là dạng chính trong cơ thể người, được tạo ra từ dehydrocholesterol trong da dưới tác động của ánh nắng mặt trời.
- Vitamin D₂: được hấp thu với một lượng nhỏ từ thực phẩm có nguồn gốc thực vật.
Nồng độ 25-hydroxyvitamin D trong huyết thanh có thể phản ánh mức dự trữ vitamin D của cơ thể và có liên quan đến các biểu hiện lâm sàng của tình trạng thiếu hụt vitamin D.
Ứng dụng lâm sàng của xét nghiệm 25-hydroxyvitamin D liên quan đến đánh giá và theo dõi các bệnh lý như:
- Còi xương
- Nhuyễn xương
- Loãng xương sau mãn kinh
- Bệnh xương do thận ở trẻ em
Xét nghiệm có thể được sử dụng như phương tiện hỗ trợ đánh giá các bệnh lý nêu trên.
Hiện nay, các phương pháp xét nghiệm 25-OH VD chủ yếu bao gồm:
- Xét nghiệm miễn dịch enzym (ELISA)
- Xét nghiệm miễn dịch hoá phát quang (CLIA)
- Sắc ký miễn dịch vàng keo (GICT)
- Miễn dịch đo độ đục latex
【Nguyên lý xét nghiệm】
Sản phẩm sử dụng hạt từ và công nghệ hoá phát quang để thực hiện xét nghiệm miễn dịch theo nguyên lý cạnh tranh.
Quy trình xét nghiệm như sau:
Trước tiên, mẫu thử, hạt từ streptavidin phủ kháng thể đơn dòng dê kháng 25-OH VD người gắn biotin và dung dịch tách được thêm vào ống phản ứng để ủ. Dung dịch tách sẽ giải phóng 25-OH VD khỏi protein gắn trong mẫu, cho phép kháng thể đặc hiệu trên hạt từ gắn với 25-OH VD trong mẫu.
Tiếp theo, dẫn xuất 25-OH VD gắn enzyme phosphatase kiềm (ALP) được thêm vào ống phản ứng và gắn với các vị trí kháng thể còn trống trên hạt từ. Sau đó, các chất không liên kết và enzyme liên hợp dư thừa được loại bỏ bằng bước rửa.
Cuối cùng, cơ chất phát quang (AMPPD) được thêm vào. Enzyme ALP xúc tác phản ứng phát quang, tạo ra photon. Số lượng photon phát ra tỷ lệ nghịch với nồng độ 25-OH VD trong mẫu.
Nồng độ 25-OH VD trong mẫu được tính toán thông qua đường chuẩn giữa nồng độ và giá trị phát quang tương đối (RLU).
【Thành phần chính】
Thuốc thử 1 (R1): Hạt từ miễn dịch
- Kháng thể đơn dòng cừu kháng 25-OH VD người: 0,2 µg/mL
- Hạt từ: 0,2 mg/mL
Thuốc thử 2 (R2): Chất liên hợp enzyme
- Dẫn xuất 25-OH VD gắn enzyme phosphatase kiềm (ALP): 0,25 µg/mL
Thuốc thử 3 (R3): Dung dịch phản ứng
- Dung dịch tách (acetat natri): 0,2 mol/L
Chất hiệu chuẩn (Calibrator)
- 25-Hydroxyvitamin D
- Ngày sản xuất và hạn dùng được ghi trên nhãn
- Hệ thống đo lường truy xuất chuẩn NIST SRM 972a
⚠️ Không được hoán đổi hoặc trộn lẫn các thành phần của các lô thuốc thử khác nhau.
Các sản phẩm cần sử dụng kèm:
- Vật liệu kiểm soát chất lượng miễn dịch (Số chứng nhận đăng ký: Guoxie Zhujin 20142406217)
- Dung dịch rửa (Số ĐK: Xiebei 20160047 / Guoxiebei 20190141 / Guoxiebei 20190142/ Susu Xiebei 20180235)
- Dung dịch cơ chất cho hệ thống miễn dịch tự động
(Số ĐK: Chuanrong Xiebei 20160048/ Guoxiebei 20140158)
【Điều kiện bảo quản và hạn dùng】
- Thuốc thử chưa mở: hạn dùng 12 tháng khi bảo quản kín ở 2–8°C, tránh ánh sáng.
- Sau khi mở chai: ổn định 28 ngày khi bảo quản ở 2–8°C, tránh ánh sáng.
【Thiết bị áp dụng】
- Máy miễn dịch hoá phát quang tự động Orienter: LA2000, LA3000, LA3000S
- Máy miễn dịch tự động: Access 2 (81600N)
- Máy miễn dịch hoá phát quang: UniCel DxI 800
【Yêu cầu mẫu】
- Mẫu phải là huyết thanh người, được thu thập theo quy trình chuẩn.
- Mẫu cần được vận chuyển và bảo quản ở nhiệt độ thấp. Ly tâm ngay sau khi lấy máu và xét nghiệm trong ngày.
- Bảo quản 2–8°C: tối đa 48 giờ
- Bảo quản −20°C: tối đa 6 tháng
- Tránh đông – rã đông nhiều lần
- Trước khi xét nghiệm, mẫu cần được cân bằng về nhiệt độ phòng.
【Phương pháp xét nghiệm】
1. Chuẩn bị thuốc thử
Bộ xét nghiệm là dạng lỏng, sẵn sàng sử dụng, không cần pha chế.
2. Chuẩn bị thí nghiệm
- Trước khi sử dụng Bộ xét nghiệm mới lần đầu, nhẹ nhàng đảo ngược nhiều lần để trộn đều hạt từ. Không đảo ngược chai thuốc thử đã mở.
- Chất hiệu chuẩn và sản phẩm QC phải được cân bằng về nhiệt độ phòng trước khi xét nghiệm.
- Đặt chai thuốc thử vào khoang thuốc thử của máy. Máy sẽ quét mã vạch hoặc người vận hành nhập thủ công.
- Đặt chất hiệu chuẩn vào khoang mẫu, quét mã vạch và khởi động chương trình hiệu chuẩn.
- Đặt mẫu hoặc QC vào khoang mẫu, thiết lập thông tin theo hướng dẫn máy và bắt đầu chương trình chạy.
3. Quy trình hiệu chuẩn và đo mẫu
| Thành phần | Hiệu chuẩn (µL) | Mẫu (µL) |
| Mẫu | – | 30 |
| Chất hiệu chuẩn | 30 | – |
| Thuốc thử R3 | 50 | 50 |
| Thuốc thử R1 | 50 | 50 |
Trộn đều và ủ 20 phút → thêm R2: 50 µL → trộn đều, ủ 5 phút, rửa, thêm dung dịch cơ chất và đo giá trị phát quang.
Chu kỳ hiệu chuẩn là 14 ngày và cần hiệu chuẩn trong các trường hợp:
- Khi sử dụng lô thuốc thử mới;
- Khi kết quả QC nằm ngoài giới hạn cho phép.
【Kiểm soát chất lượng】
Mỗi phòng xét nghiệm cần thiết lập hệ thống và quy tắc kiểm soát chất lượng riêng theo GB/T 20468-2006 – Hướng dẫn kiểm soát chất lượng nội bộ đối với các phép đo định lượng trong phòng xét nghiệm lâm sàng.
Chỉ khi giá trị QC nằm trong giới hạn cho phép mới tiến hành xét nghiệm mẫu. Nếu vượt giới hạn, cần áp dụng biện pháp khắc phục phù hợp hoặc liên hệ với nhà sản xuất.
【Tính toán kết quả】
Máy phân tích tính toán nồng độ 25-OH VD dựa trên đường chuẩn và giá trị RLU đo được của mẫu.
Đơn vị kết quả: ng/mL
【Khoảng tham chiếu】
Dựa trên các tài liệu hiện có, giá trị tham chiếu khuyến nghị của 25-hydroxyvitamin D như sau:
| Tình trạng vitamin D | Người lớn | Trẻ em |
| Thiếu | < 20 ng/mL | < 15 ng/mL |
| Không đủ | 20 – 30 ng/mL | 15 – 20 ng/mL |
| Đủ | 30 – 100 ng/mL | 20 – 100 ng/mL |
Quần thể khỏe mạnh: 5,45 – 48,00 ng/mL
Khoảng tham chiếu được thiết lập dựa trên CLSI C28-A3, kết quả xét nghiệm của ít nhất 120 mẫu lâm sàng và các tài liệu tham khảo khác. Do sự khác biệt về địa lý, chủng tộc, giới tính và độ tuổi, khuyến cáo mỗi phòng xét nghiệm tự thiết lập hoặc xác minh khoảng tham chiếu riêng.
【Diễn giải kết quả】
- Kết quả xét nghiệm chỉ được sử dụng như một phần của đánh giá lâm sàng tổng thể; chẩn đoán cần kết hợp với triệu chứng lâm sàng và các phương pháp chẩn đoán khác.
- Nếu nồng độ mẫu vượt quá khoảng đo, báo cáo kết quả >160,00 ng/mL. Khi pha loãng mẫu có giá trị thấp gần giới hạn phát hiện, hệ số pha loãng tối đa khuyến nghị không quá 5 lần.
Đánh giá
Chưa có đánh giá nào.