Mô tả

Bộ thuốc thử định lượng Serum Amyloid A (SAA) – phương pháp hóa phát quang

【QUY CÁCH ĐÓNG GÓI】

• 50 test/hộp
• 2 × 50 test/hộp
• 4 × 50 test/hộp
• 100 test/hộp
• 200 test/hộp
• 300 test/hộp
• 400 test/hộp

Chất hiệu chuẩn: 0,5 mL × 2; 1,0 mL × 2; 0,5 mL × 6; 1,0 mL × 6 (tùy chọn)
Chất kiểm soát: 0,5 mL × 2; 1,0 mL × 2; 2,0 mL × 2 (tùy chọn)

【MỤC ĐÍCH SỬ DỤNG】

Bộ thuốc thử này được sử dụng để định lượng ngoài cơ thể (in vitro) nồng độ Serum Amyloid A (SAA) trong mẫu huyết thanh người.

Serum Amyloid A (SAA) tương tự như Protein C-reactive (CRP) và được sử dụng để đánh giá quá trình đáp ứng viêm cấp. SAA là một trong những chỉ dấu nhạy nhất ở giai đoạn sớm của nhiễm virus, có thể tăng cao trong cả nhiễm virus và nhiễm vi khuẩn. Đặc biệt, trong nhiễm virus đường hô hấp và bệnh tay chân miệng do virus, nồng độ SAA tăng rõ rệt trong khi CRP thường không tăng hoặc chỉ tăng nhẹ.

SAA bắt đầu tăng nhanh khoảng 8 giờ sau khi phản ứng viêm xảy ra, có thể tăng tới 1000 lần so với nồng độ ban đầu và vượt ngưỡng tham chiếu sớm hơn CRP. Thời gian bán thải của SAA khoảng 50 phút; khi kháng nguyên được loại bỏ, nồng độ SAA nhanh chóng trở về mức bình thường. Do đó, SAA là chỉ dấu nhạy để phản ánh tình trạng nhiễm trùng và kiểm soát viêm. Trong quá trình bệnh cải thiện và hồi phục, SAA là protein pha cấp giảm đầu tiên và trở về bình thường sớm nhất.

Hiện nay, các phương pháp xét nghiệm SAA chủ yếu bao gồm: phương pháp sắc ký vàng keo, tán xạ đo độ đục, miễn dịch đo độ đục tăng cường latex, v.v.

【NGUYÊN LÝ XÉT NGHIỆM】

Sản phẩm sử dụng công nghệ vi hạt từ và hóa phát quang, áp dụng nguyên lý miễn dịch kẹp (sandwich).

Mẫu thử, vi hạt từ gắn streptavidin được phủ kháng thể đơn dòng chuột kháng SAA người đã được biotin hóa, và kháng thể đơn dòng chuột kháng SAA người gắn enzyme phosphatase kiềm (ALP) được cho vào ống phản ứng và ủ. SAA trong mẫu liên kết với kháng thể đặc hiệu trên vi hạt từ tạo thành phức hợp miễn dịch; đồng thời, kháng thể gắn ALP liên kết với epitope khác của SAA, hình thành phức hợp “vi hạt từ – SAA – enzyme”.

Sau bước rửa để loại bỏ các thành phần không liên kết, chất nền phát quang (AMPPD) được thêm vào. Enzyme xúc tác phản ứng phát xạ photon; cường độ phát quang (RLU) tỷ lệ thuận với nồng độ SAA trong mẫu. Thông qua đường cong hiệu chuẩn nồng độ – RLU, nồng độ SAA trong mẫu được tính toán.

【THÀNH PHẦN CHÍNH】

Thuốc thử 1 (R1): Vi hạt từ

• Kháng thể đơn dòng chuột kháng SAA người: 1–4 µg/mL
• Vi hạt từ: 0,1–0,4 mg/mL

Thuốc thử 2 (R2): Phức hợp enzyme

• Kháng thể đơn dòng chuột kháng SAA người gắn ALP: 0,1–0,5 µg/mL

Chất hiệu chuẩn SAA:

• Serum Amyloid A – nồng độ cụ thể xem trên nhãn

Chất kiểm soát SAA:

• Serum Amyloid A – nồng độ cụ thể xem trên nhãn

Hệ thống đo lường truy xuất nguồn gốc tới NIBSC 92/680.

* Các thành phần của những lô khác nhau không được hoán đổi hoặc trộn lẫn.

Sản phẩm cần sử dụng kèm:

• Dung dịch rửa (Số đăng ký tại nước sở tại: 0160047)
• Dung dịch rửa (Số đăng ký tại nước sở tại:20190141)
• Dung dịch rửa (Số đăng ký tại nước sở tại:20190142)
• Dung dịch rửa (Số đăng ký tại nước sở tại:20180235)
• Dung dịch cơ chất cho hệ thống miễn dịch tự động (Số đăng ký tại nước sở tại:20160048)
• Dung dịch cơ chất cho hệ thống miễn dịch tự động (Số đăng ký tại nước sở tại:20140158)

【ĐIỀU KIỆN BẢO QUẢN VÀ HẠN DÙNG】

• Bảo quản 2–8°C, kín, tránh ánh sáng: 15 tháng
• Sau khi mở và đưa lên máy: ổn định 28 ngày (tránh ánh sáng)
• Chất hiệu chuẩn và chất kiểm soát sau khi mở: 2–8°C, tránh ánh sáng, ổn định 28 ngày
• Ngày sản xuất và hạn dùng: xem trên nhãn

【THIẾT BỊ ÁP DỤNG】

• Máy miễn dịch hóa phát quang tự động WWT: LA2000, LA3000, LA3000S
• Máy miễn dịch hóa phát quang Beckman: 81600N (Access 2), UniCel DxI 800

(Bảng dung dịch rửa/cơ chất áp dụng theo từng máy giữ nguyên như bản gốc)

【YÊU CẦU MẪU】

1. Mẫu phải là huyết thanh người được thu thập theo quy trình chuẩn.

2. Mẫu phải được vận chuyển và bảo quản ở nhiệt độ thấp. Mẫu phải được ly tâm ngay sau khi lấy máu và xét nghiệm trong cùng ngày. Nếu không thể xét nghiệm ngay, có thể bảo quản ở 2℃～8℃ trong 48 giờ; hoặc ở -20℃ trong một tháng, tránh lặp lại chu kỳ đông lạnh-rã đông. Mẫu phải được để cân bằng ở nhiệt độ phòng trước khi xét nghiệm.

【QUY TRÌNH XÉT NGHIỆM】

1. Chuẩn bị thuốc thử

Bộ thuốc thử ở dạng dung dịch dùng ngay, không cần pha chế, có thể sử dụng trực tiếp.

2. Chuẩn bị xét nghiệm

Thực hiện theo Hướng dẫn sử dụng của bộ thuốc thử và Hướng dẫn vận hành của máy miễn dịch phát quang tương ứng.

2.1 Trước khi sử dụng lần đầu một bộ thuốc thử mới, nhẹ nhàng đảo ngược chai thuốc thử nhiều lần để đảm bảo vi hạt từ được phân tán đồng đều. Không đảo ngược chai thuốc thử đã mở nắp.

2.2 Chất hiệu chuẩn và chất kiểm soát chất lượng phải được cân bằng về nhiệt độ phòng trước khi tiến hành xét nghiệm.

2.3 Đặt chai thuốc thử vào khoang thuốc thử của thiết bị. Thiết bị sẽ tự động quét mã vạch trên chai thuốc thử hoặc có thể nhập mã vạch thủ công.

2.4 Đặt chất hiệu chuẩn vào khoang mẫu của thiết bị. Quét mã vạch hoặc nhập mã vạch thủ công để khởi động chương trình hiệu chuẩn, thiết bị sẽ tự động hoàn tất quá trình hiệu chuẩn.

2.5 Đặt chất kiểm soát chất lượng và/hoặc mẫu cần xét nghiệm vào khoang mẫu. Sau khi thiết lập thông tin mẫu theo hướng dẫn vận hành thiết bị, khởi động chương trình chạy, thiết bị sẽ tự động hoàn tất phép đo.

3. Quy trình hiệu chuẩn và đo mẫu

3.1 Hiệu chuẩn

• Sử dụng chất hiệu chuẩn đồng bộ do nhà sản xuất cung cấp.
• Thiết bị của Wovente Biotechnology: hiệu chuẩn 2 điểm hoặc 6 điểm.
• Thiết bị của Beckman Coulter: hiệu chuẩn 6 điểm.

3.2 Thiết bị thu thập tham số xét nghiệm, đường cong hiệu chuẩn gốc và giá trị đích của chất hiệu chuẩn thông qua việc quét mã vạch trên thẻ thông tin hiệu chuẩn phát quang hoặc nhập mã vạch thủ công, sau đó khởi động chương trình hiệu chuẩn.

3.3 Sau khi đo chất hiệu chuẩn, từng điểm định chuẩn trên đường cong gốc sẽ được hiệu chỉnh lại, tạo thành đường cong làm việc đặc hiệu cho từng thiết bị, dùng để đo mẫu bệnh phẩm.

3.4 Việc hiệu chuẩn và đo mẫu cần tuân thủ hướng dẫn vận hành của hệ thống thiết bị tương ứng.

4. Thể tích phản ứng

Trộn đều, ủ 5 phút, rửa, thêm dung dịch cơ chất, sau đó đo cường độ phát quang.

Lưu ý: Các hệ thống miễn dịch phát quang tự động có sự khác biệt về tham số chương trình và phương thức nhập dữ liệu. Việc cài đặt chi tiết cần tham khảo hướng dẫn vận hành của từng thiết bị hoặc liên hệ với nhà sản xuất.

5. Đo chất kiểm soát và mẫu thử

5.1 Pha loãng tự động

Thực hiện theo hướng dẫn vận hành thiết bị. Thiết bị sẽ tự động pha loãng và tính toán ngược kết quả.

5.2 Pha loãng thủ công

• Trên giao diện thiết bị, chọn không pha loãng.
• Pha loãng mẫu theo tỷ lệ 1:199 bằng dung dịch rửa do nhà sản xuất cung cấp.
• Tiến hành đo trên máy, kết quả cuối cùng nhân với hệ số 200.

6. Chu kỳ hiệu chuẩn

Chu kỳ hiệu chuẩn: 28 ngày.

Cần tiến hành hiệu chuẩn lại trong các trường hợp sau:

• Khi sử dụng lô thuốc thử mới;
• Khi kết quả chất kiểm soát chất lượng vượt ngoài giới hạn cho phép.

QUY TRÌNH KIỂM SOÁT CHẤT LƯỢNG

Mỗi phòng xét nghiệm cần xây dựng hệ thống và quy tắc kiểm soát chất lượng nội bộ phù hợp với các yêu cầu quản lý hiện hành.

Khuyến nghị thực hiện kiểm soát chất lượng theo GB/T 20468-2006 – Hướng dẫn kiểm soát chất lượng nội bộ cho phép đo định lượng trong phòng xét nghiệm lâm sàng, sử dụng chất kiểm soát chất lượng để theo dõi độ ổn định của phép đo.

Chỉ khi giá trị đo của chất kiểm soát nằm trong giới hạn cho phép đã được xác định, phòng xét nghiệm mới được tiến hành đo mẫu bệnh phẩm.

Trong trường hợp kết quả chất kiểm soát vượt ngoài giới hạn quy định, cần:

• Thực hiện các biện pháp khắc phục thích hợp, và/hoặc
• Liên hệ với nhà sản xuất để được hỗ trợ kỹ thuật.

TÍNH TOÁN KẾT QUẢ XÉT NGHIỆM

Thiết bị tính toán nồng độ SAA trong mẫu thử dựa trên giá trị phát quang tương đối (RLU) thu được của mẫu cần xét nghiệm và đường cong hiệu chuẩn.

Đơn vị nồng độ báo cáo của xét nghiệm: mg/L

KHOẢNG THAM CHIẾU

≤ 10,00 mg/L

Khoảng tham chiếu được nhà sản xuất xây dựng dựa trên:

• Hướng dẫn CLSI C28-A3;
• Kết quả đo không ít hơn 120 mẫu lâm sàng;
• Các tài liệu khoa học liên quan.

Do sự khác biệt về địa lý, chủng tộc, giới tính và độ tuổi, khuyến nghị mỗi phòng xét nghiệm:

• Thiết lập khoảng tham chiếu riêng, hoặc
• Thực hiện xác nhận/chuyển đổi khoảng tham chiếu trước khi áp dụng lâm sàng.

DIỄN GIẢI KẾT QUẢ XÉT NGHIỆM

Kết quả đo thu được từ bộ thuốc thử này chỉ là một phần của đánh giá lâm sàng tổng thể.

Việc chẩn đoán cần được đánh giá tổng hợp dựa trên:

• Triệu chứng lâm sàng;
• Tiền sử bệnh;
• Các xét nghiệm và phương pháp chẩn đoán khác có liên quan.